一、光镊技术的由来
光镊技术的诞生可追溯至1970年,当时美国科学家阿瑟·阿什金(Arthur Ashkin)进行了一项开创性的实验。他观察到,当一束激光照射到微米级的微粒上时,微粒会受到一个沿激光传播方向的推力。进一步地,当两束激光相对照射时,能够将微粒稳定地夹持在光束的交汇处。这一发现为光捕获微粒的研究领域奠定了基础。
阿什金继续深入研究,发现利用一束会聚的激光可以在三维空间内精确控制微粒的位置。这种技术,即光镊,通过光的束缚作用实现对微粒的“钳”式捕捉。与传统的机械镊子不同,光镊采用了一种温和且非机械接触的方式来进行微粒的夹持和操纵。
光镊技术的独特之处在于,微粒一旦进入以光束为中心的特定区域,便会自发地向光束中心移动,这种现象仿佛微粒被吸尘器吸入一般,显示出光镊的“引力”效应。一旦微粒位于光束中心,若无外界力的干扰,它将保持在中心位置。即便由于外界作用或微粒自身的布朗运动导致其偏离中心,微粒也会迅速恢复到原位,使得光镊宛如一个“陷阱”。
这个“陷阱”具有一定的边界,边界处存在一个势垒。只有当微粒的动能足以克服这个势垒时,它才能逃离“陷阱”。否则,微粒将继续被限制在“陷阱”内,这个区域被称为阱域。
由此,会聚的激光光束能够有效地“抓住”并操控物体,因此得名光镊,亦即光学镊子(optical tweezers)。光镊技术的发明,为物理学和生物学等领域提供了一种有力的工具。
二、光镊技术的原理
1、光捕捉
光捕获实际是动量守恒原理的体现,利用光与物质间的动量传递的力学效应实现捕获。
光的本质是特定波长的电磁波,携带着动量和能量。通过透镜聚焦后的激光束,对其焦点附近的微粒产生力的作用。光对物体施加的这个力非常小,大约是10-12 N的量级,但它可以用来操纵像微球这样的微小物体。这种强度力一般会分为两种,分别为散射力(Scattering force)和梯度力(Gradient force)。
散射力,由光束散射过程中与物体交换动量获得,它是沿着光的传播方向,使得粒子沿着光束传播的方向移动。由于光束的高斯分布,激光束在横向方向上有强度梯度,这种强度梯度产生了梯度力,梯度力沿光场梯度方向。梯度力将微球(其折射率比周围环境高)吸引到光强最强的区域。当激光聚焦到一个紧密的点时,在轴向上有一个强度梯度,散射力的轴向分量利用辐射压力将物体推向光束传播的方向。如果轴向梯度力大到足以平衡散射力,物体将在激光束的焦点区域的一个平衡位置实现捕获。
当粒子的特征尺寸远大于激光波长时,光线穿过粒子时发生折射和反射,发生的动量传递而产生的力学效应表现为光力,可以通过简单的几何光学模型来对解释光阱力。
图1:几何光学近似下的单光束光阱捕获---当微粒位置偏离光束中心时
如图1所示,高斯光束经过一个显微镜物镜聚焦,其中两束光线(白色箭头a和b)通过介质微球,由于光束发生折射,光束会改变其传播方向,从而导致动量的变化。当介质微球不在光束中心的部分,中心部分意味着光束强度较高,即图1中的光线 a 向左发生折射,这就意味着激光动量向左变化,根据动量守恒定律,粒子会受到一个向右的动量,因此会有一个力Fa指向光束的中心(图1中的黑色虚线即表示光束中心)。同样的,强度较弱的光线b向右发生折射,其动量向右改变,并在远离光束中心的介质微球上施加一个偏离光束中心的光力Fb。从图1中可以看出,光线a的强度比光线b强的多,那么合力将粒子向右边推。同理,当粒子处于光束轴的右侧时,微粒小球最终就会受到一个向左的光力。因此,光场强度梯度总是导致粒子上的梯度力(Fgrad)趋向于光束强度最强的位置。此外,粒子表面反射的光线会沿光束传播的方向产生一个向前的散射力(Fscatt)。
图2:几何光学近似下的单光束光阱捕获---当微粒位置高于焦点时
图2表示的是介质微球在高度聚焦的激光束中,纵向梯度力将为例推向聚焦平面。
图3:几何光学近似下的单光束光阱捕获---作用于微粒上的合力
如图3所示,合力总是将微粒推向光束的焦点。只要满足 Fgrad≫Fscatt,在高度聚焦的激光束中,就可以形成稳定的三维势阱。
2、光操控
光镊的基本功能是对微小微粒的捕获和操控。
捕获是从样品室中将样品抓到光阱中;操控就是将捕获的样品挪动到样品室中新的位置。移动微粒所在的环境或光镊都能达到相对运动的目的。
比较方便和常用的方法是使目标物体与所在环境相对运动,即固定光镊,操控目标物体所在环境,通过移动样品台带动样品室运动,这样被光镊固定的样品就能改变其位置,称之为被动操控(passive manipulation)。还有一种是通过控制光镊的运动实现微粒与周围环境的相对运动,称之为主动操控(active manipulation)。
1)光陷阱效应
当微粒偏离光镊的中心为某个距离R时,微粒就受到光的阱力作用,会以一定的加速度滑入光镊的中心;
我们定义以R为半径的圆为光阱的平面阱域(trap domain),微粒受光的阱力作用滑入光镊中心的现象称为光陷阱效应(Optical trap effect)。
阱域就是以光阱的中心为圆心,以R为半径覆盖的区域。微粒陷入光阱中心的过程是一个加速过程。阱域的大小与聚焦镜、光强以及微粒的参数等有关。
2)直接操控微米微粒
横向操控,是指在垂直于光轴的平面内对微粒的操控,我们通过显微镜视场可以观测这种操控。在该平面,可以用光镊捕获和控制微粒进行任意方向的运动。先可以移动样品台将目标微粒移至光镊中心实现捕获,也可以通过光陷阱效应获得目标微粒。一旦目标微粒被光镊控制,就可以通过操控样品台带动样品室,实现被光镊控制的微粒与其所在的环境做相对运动,实现操控。
轴向操控,是指沿光线传播方向操控微粒。轴向的操控是通过调节物镜距样品室的高度控制光阱的轴向位置,使捕获物镜与样品台在纵方向上产生相对运动,或位置的改变,实现光阱对捕获微粒的轴向操控。
3)间接操控微米微粒
对于纳米微粒,需要利用光阱系统能清晰分辨的微米微粒作为“手柄”,将纳米微粒先通过化学偶联牢固地与微米微粒形成刚性的结合。光镊通过操控“手柄”达到操控纳米微粒的目的。这种间接操控法使光镊操控范围扩展到纳米尺度,已成为一种有效的单分子纳米操控技术。
三、光镊技术的特点
(1)非接触性操控:光镊利用光场与物体交换动量,实现对细胞的温和夹持,无集中受力点,避免了机械损伤。通过选择适宜的激光波长和能量,确保了对捕获样品的安全性,实现了真正的非接触式操作。
(2)穿透性操作:光镊具备独特的穿透能力,能够无障碍地越过透明屏障,操控封闭系统内部的微粒,如细胞器等。这一特性使得光镊在活体生物研究中具有机械方法无法比拟的优势,实现了无菌操作的精确控制。
(3)维持细胞生存环境:光镊技术在液体环境中操作,能够保持细胞的“天然”生存环境,特别适用于活体细胞、细胞器及生物大分子的操控与研究,为活体生物学研究提供了有力工具。
(4)微米、纳米尺度操控:光镊能够操控的微粒尺度范围广泛,覆盖了生物大分子、细胞器、细胞的尺度。在活体生物研究领域,光镊填补了微米、纳米尺度操作工具的空白,成为该尺度范围内的唯一操作手段。
(5)远距离遥控操作:光镊的机械部件与捕获对象距离远大于对象尺度,实现了“遥控”式远距离操控,不会干扰微粒周围环境,便于与其他生物学技术结合,拓展功能,获取更多信息。
(6)高可视性动态观测:光镊技术能够使细胞在液体中指定位置悬浮,保持活性且不扰动生存环境。其高可视性为研究者提供了极大的便利,实现了对活体细胞和大分子生命活动的“实时动态”显示。
(7)微小力的精确探测:光镊作为一种灵敏的力传感器,能够实时感应微小负荷,力的分辨精度高达几飞牛。光镊作为微小力的探针,为定量生物学的发展提供了有力支持,成为揭示生命过程规律的有力武器。
(8)强大的技术兼容性:光镊系统基于光学原理和显微观测设计,与多种光学技术具有良好的兼容性。它可与常规显微镜及其配置功能相结合,还能与荧光激发、DIC微分干涉仪、微针辅助测量等技术融合。此外,光镊与拉曼光谱技术的结合,为单细胞和单分子的拉曼光谱测量提供了可能。
四、《光镊技术》
五、参考资料:
(1)光束的力量—斩获2018诺贝尔物理学奖的光镊技术---深圳大学学报理工版
(2)纳米线的光镊操控及应用_吴易璇
(3)飞秒光镊技术的研究进展_顾兵
(4)真空光镊技术与应用_田原
(5)拉曼光镊技术的研究进展及应用_王子奇